Atividade anti-inflamatória e antioxidante in vitro da alternanthera brasiliana

Figueira, Mariana Moreira

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DC Field	Value	Language
dc.contributor	Fronza, Marcio	-
dc.contributor.author	Figueira, Mariana Moreira	-
dc.date.accessioned	2020-11-04T19:53:48Z	-
dc.date.available	2020-11-04T19:53:48Z	-
dc.date.issued	2019-03-29	-
dc.identifier.uri	https://repositorio.uvv.br//handle/123456789/526	-
dc.description.abstract	Este estudo teve como objetivo analisar as características fitoquímicas e investigar o potencial farmacoterapêutico das folhas da Alternanthera brasiliana (Amaranthace) relacionado as atividades antioxidante e anti-inflamatória empregando métodos químicos e bioensaios in vitro em cultura de células. Extratos das folhas foram preparados em ultrassom empregando hexano (EHAB), água (EAAB), etanol 70% (EE70AB) e 100% (EEAB), separadamente. O teor de polifenóis totais e flavonóides foram determinados pelo método do Folin-Ciocalteau e após reação com cloreto de alumínio, respectivamente. Os principais metabólitos secundários presentes nos extratos foram identificados em espectrômetro de massas íon trap linear (Q-Trap). A atividade antioxidante foi investigada pelos métodos químicos do sequestro do radical DPPH, ABTS e redução do ferro (FRAP), e por métodos in vitro de inibição da produção do ânion superóxido e efeito preventivo contra danos causados pelo peróxido de hidrogênio em cultura de macrófagos. O efeito citotóxico foi avaliado pelo método colorimétrico do MTT. As atividades anti-inflamatória e imunomoduladora foram avaliadas in vitro quanto à influência dos extratos sobre a produção de óxido nítrico (NO), por meio da dosagem indireta de nitrito pelo método de Griess in vitro na cultura de macrófagos estimulados com LPS, pela quantificação de citocinas pró e anti-inflamatórias como o TNF-α, IL-6 e IL-10 pela técnica de ELISA. Além disso, foi determinado a atividade do Fator de Transcrição Nuclear kappa B (NF-κB) pela expressão de luciferase e através da expressão da Proteína Quinase Ativada por Mitógeno p38 (p38MAPK) por Western Blot. Os compostos majoritários identificados nos EAAB e EE70AB das folhas da A. brasiliana foram os flavonóides C-hexosil-luteolina O-hexosídeo, Hexanosídeo de (iso) vitexina, Isovitexina, Vitexina-2''-O-rhamnosídeo e Hesperedina. O EAAB apresentou maior ação antioxidante com valores de IR50 para o ABTS e DPPH de 42,1 ± 0,9 e 74,0 ± 10,9 μg/mL respectivamente; e o E70EAB apresentou o menor IR50 no ensaio do FRAP (6,5 ± 0,7 μg/mL). O EE70AB apresentou maior inibição da produção de NO (IC50 de 127,3 ± 8,7 μg/mL) em macrófagos estimulados por LPS, e em conjunto, também apresentou resultados significativos na inibição da produção do ânion superóxido (60,3 ± 1,2%, 50 μg/mL). O EAAB, HEAB e EEAB demonstraram inibição significativa da citocina TNF-α em 32,6 ± 1,9 %, 33,0 ± 1,9 % e 66,1 ± 2,4 %, respectivamente, na concentração de 10 μg/mL. O ácido gálico utilizado como controle positivo obteve inibição de 21,5 ± 2,8 %, na mesma concentração dos extrados. Na inibição de IL-6, o EE70AB e EEAB demonstraram inibição significativa da citocina em 62,6 ± 5,0 % e 77,2 ± 4,9 %, respectivamente, na concentração de 10 μg/mL, também apresentando inibição mais potente do que o ácido gálico de 34,4 ± 1,2 % na mesma concentração. Todos os extratos testados (20 μg/mL) apresentaram de 30 a 35% de inibição sobre a atividade do NF-κB e nenhum efeito significativo sobre a atividade de p38 MAPK. Os resultados obtidos com os extratos das folhas da A. brasiliana sugerem que a planta possui promissoras atividades bioativas, atuando no controle de radicais livres, estresse oxidativo e inibindo importantes mediadores inflamatórios.	pt_BR
dc.description.sponsorship	Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES), Fundação de Amparo à Pesquisa e Inovação do Espírito Santo (FAPES)	pt_BR
dc.language.iso	pt_BR	pt_BR
dc.subject	Citocinas	pt_BR
dc.subject	Inflamação	pt_BR
dc.subject	Antioxidante	pt_BR
dc.subject	NF-κB	pt_BR
dc.subject.vocabulary	CNPQ::CIENCIAS DA SAUDE::FARMACIA	pt_BR
dc.subject.vocabulary	CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICA	pt_BR
dc.title	Atividade anti-inflamatória e antioxidante in vitro da alternanthera brasiliana	pt_BR
dc.type	Dissertation	pt_BR
dc.publisher.country	brasil	pt_BR
dc.description.resumo	This study aimed to analyze the phytochemical characteristics and to investigate the pharmacotherapeutic potential of the leaves of Alternanthera brasiliana (Amaranthace) related to the antioxidant and anti-inflammatory activities using chemical methods and in vitro bioassays in cell culture. Leaf extracts were prepared using ultrasonic assisted maceration with hexane (EHAB), water (EAAB), 70% ethanol (EE70AB) and 100% ethanol (EEAB). The total polyphenols and flavonoids content were determined by the Folin-Ciocalteau method and after reaction with aluminum chloride, respectively. The main secondary metabolites present in the extracts were identified in a linear trap ion mass spectrometer (Q-Trap). The antioxidant activity was investigated by the chemical methods DPPH and ABTS radical scavenging activity and Ferric Reducing Antioxidant Power (FRAP) Assay, and by in vitro methods of inhibition of superoxide anion production and preventive oxidative damage caused by hydrogen peroxide in macrophage culture. The cytotoxic effect was evaluated by the MTT colorimetric method. The in vitro anti-inflammatory and immunomodulatory activities were evaluated by influence of the extracts on the production of nitric oxide (NO), by indirect nitrite quantification using Griess method; by the quantification of pro-and anti-inflammatory cytokines such as TNF-α, IL-6 and IL-10 by the ELISA technique; and by the determination of the Nuclear Transcription Factor kappa B (NF-κB) activity and expression of Mitogen Activated Protein Kinase p38 (p38MAPK). The major compounds identified in the leaves of EAAB and EE70AB of A. brasiliana were C-hexosyl-luteolin O-hexoside, Hexanoside of (iso) vitexin, Isovitexin, Vitexin-2'-O-rhamnoside and Hesperedin. EAAB presented higher antioxidant action with IR50 values for ABTS and DPPH of 42.1 ± 0.9 and 74.0 ± 10.9; and the E70EAB presented the lowest IR50 in the FRAP test (6.5 ± 0.7 μg/mL). The EE70AB exhibited the highest inhibition of NO production (IC50 of 127.3 ± 8.7 μg/mL) by LPS stimulated macrophages and, together, also showed significant inhibition of superoxide anion production (60, 3 ± 1.2%, at 50 μg/ml). The EAAB, HEAB and EEAB demonstrated significant inhibition of cytokine TNF-α by 32.6 ± 1.9%, 33.0 ± 1.9% and 66.1 ± 2.4%, respectively, at of 10 μg/mL concentration, exhibiting better activity than gallic acid (21.5 ± 2.8%), also tested at 10 μg/mL. EE70AB and EEAB also suppress the IL-6 production at 10 μg/mL concentration reaching inhibition rates of 62.6 ± 5.0% and 77.2 ± 4.9%, respectively. All tested extracts (at 20 μg/mL) exhibit between 30 to 35% inhibition on NF-κB activity and no significant effect on p38 MAPK activity. Altogether, the results obtained with A. braziliana leaf extracts suggest that the plant has promising bioactive activities, acting in the control of free radicals, oxidative stress and inhibiting important inflammatory mediators. Keywords: Cytokines, inflammation, antioxidant	pt_BR
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