Testosterona em concentração anabólica induz apoptose em cardiomiócitos in vitro com participação do TNF-α do SRA

Abstract

Esteroides anabólicos androgênicos (EAA) utilizados de forma abusiva acarretam em graves complicações cardíacas, como infarto do miocárdio e morte súbita. Apoptose tem sido observado em grande escala em doenças cardíacas, sendo fator marcante na transição entre hipertrofia cardíaca compensatória para falência cardíaca. A testosterona (T), em concentração anabólica induz apoptose em cultura de miócitos cardíacos. Entretanto, pouco se sabe sobre a participação das diferentes vias apoptóticas na apoptose induzida por EAA em células cardíacas. Existem evidências de que os EAA exercem influência sobre o sistema renina-angiotensina (SRA) e TNF-α no coração. O objetivo do presente trabalho foi o de avaliar se a apoptose e a ativação da caspase-3, em miócitos cardíacos, induzidas pela T em concentrações anabolizantes, envolve o aumento da atividade da ECA e da concentração de TNF-α. Cardiomiócitos foram tratados com testosterona (100 μM), doxorrubicina (5 μg/mL), etanercept (100 μg/mL) e losartan (0,1 μM, Los). O tempo de tratamento com as diferentes substâncias, de forma isolada ou em associação (T+eta; T+los), nos poços de cultura foi 72 h. Após o período de tratamento, foram realizados os experimentos de viabilidade celular por MTT (T, 0,5-200 μM), avaliação da apoptose em citometria de fluxo, avaliação da atividade proteolítica da caspase-3, quantificação de TNF-α e avaliação da atividade da enzima conversora de angiotensina (ECA). O tratamento com T resultou num decréscimo concentração-dependente das células viáveis e aumento concomitante da apoptose [anexina-V(+); 5 μM: 4,81±0,10%, 50 μM: 8,94±0.22% e 100 μM: 19,28±0.17%; p<0,01]. A atividade proteolítica da caspase-3 sobre o substrato p-Nitroanilina foi significativamente aumentada após tratamento com T (0,320±0,03 μM pNA/min/mL; p<0,01 em relação a H9c2: 0,028±0,004 μM pNA/min/mL). Testosterona promoveu elevação nos níveis de TNF-α e aumento da atividade da ECA. Os co-tratamentos com os inibidores losartan e etanercept, foram capazes de reduzir os efeitos promovidos pela T sobre os cardiomiócitos. Portanto, este estudo sugere a existência de uma interação entre T, Ang II e TNF-α na indução de apoptose e aumento da atividade da caspase-3 em cultura de miócitos cardíacos e que esse processo contribui para a redução da viabilidade dessas células (efeito citotóxico) induzida por concentração anabólica de testosterona.