1. COLLAB UVV
  2. Teses e Dissertações
  3. Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas
  4. Tese de Doutorado
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dc.contributorFronza, Marcio-
dc.contributor.authorGuidoni, Marcio-
dc.coverage.spatialbrasil-
dc.date.accessioned2025-04-09T20:21:53Z-
dc.date.available2025-04-09T20:21:53Z-
dc.date.issued2022-04-19-
dc.identifier.urihttps://repositorio.uvv.br//handle/123456789/2001-
dc.description.abstractNas últimas décadas, a cultura de células vegetais tornou-se uma promissora ferramenta para a produção de ingredientes bioativos para usos biomédicos e cosméticos, porém, o sucesso até o momento tem sido limitado. Este estudo teve como objetivo avaliar a eficácia desse processo biotecnológico para a obtenção de um extrato de células-tronco de Coffea canephora bioativo (SCECC) e posterior produção do lipossoma a partir desse extrato (LSCECC) com propriedades antioxidantes, anti-inflamatórias e regenerativas. Os teores de fenólicos e flavonóides totais foram determinados no extrato SCECC por análises espectrofotométricas. A atividade antioxidante foi avaliada usando os métodos colorimétricos do sequestro do radical livre ABTS e a redução do íon férrico (FRAP). A atividade anti-inflamatória foi estudada em macrófagos RAW 264.7 estimulados por lipopolissacarídeos, investigando a produção de ânion superóxido (O2 ●-), óxido nítrico (NO), fator de necrose tumoral alfa (TNF-a), interleucina-6(IL-6), e a atividade do fator nuclear kappa B (NF-kB). Além disso, a capacidade do SCECC em estimular a proliferação e migração de fibroblastos foi avaliada pelo ensaio do scratch assay. Uma formulação lipossomal foi desenvolvida e caracterizada através da técnica de espalhamento dinâmico de luz (DLS), microscopia de força atômica (AFM) e microscopia eletrônica de transmissão (TEM). O efeito sobre o reparo tecidual em úlceras cutâneas foi avaliado em ratos wistar, que foram divididos aleatoriamente em dois grupos de 20 animais. Úlceras de 150 mm de diâmetro foram criadas na região posterior de cada animal, e tratadas diariamente com LSCECC (controle positivo) e controle. Após 2, 7, 14 e 21 dias do ferimento, cinco ratos de cada grupo foram sacrificados e a redução da área da lesão e reepitelização foram avaliadas. Biópsias das feridas foram coletadas para posterior análise histológica e bioquímica. Alto conteúdo fenólico e atividade antioxidante foram observados no extrato de SCECC. In vitro, o SCECC promoveu a proliferação e migração de fibroblastos e suprimiu os mediadores pró-inflamatórios O2●-, NO, TNF-a e IL-6 de forma dose-dependente. Além disso, o SCECC foi capaz de inibir o fator de transcrição NF-kB. In vivo, o uso do LSCECC resultou em uma reepitelização mais rápida, exibindo uma redução significativa na área da ferida de 36,4, 42,4 e 87,4% após 7, 10 e 14 dias após produção das feridas, respectivamente, comparado ao grupo controle. As análises histológicas e bioquímicas das biópsias das lesões demostraram que as feridas tratadas com LSCECC exibiram um aumento no tecido granular e uma resposta inflamatória regulada pela modulação da liberação de citocinas pró-inflamatórias TNF-α, IL-6 e aumento da liberação de anti-inflamatória IL-10. Além disso, as feridas tratadas com LSCECC exibiram um aumento acentuado na deposição e organização das fibras de colágeno no local da ferida e melhorou a qualidade do tecido cicatricial devido ao aumento de TGF-β e VEGF. Em geral, os resultados revelaram que o extrato de células-tronco de C. canephora possui efeito modulador no processo de regeneração de tecidos e pode ser benéfico para o desenvolvimento de produtos cosméticos.-
dc.description.sponsorshipCoordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES), Fundação de Amparo à Pesquisa e Inovação do Espírito Santo (FAPES), Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)-
dc.language.isopt-
dc.subjectCélulas tronco vegetal-
dc.subjectConilon-
dc.subjectEnvelhecimento celular-
dc.subjectCafé-
dc.subjectLipossoma-
dc.titleAvaliação da atividade do extrato de suspensões de células tronco vegetal de Coffea canephora no processo de envelhecimento e regeneração da pele-
dc.typeThesis-
dc.description.resumoIn recent decades, plant cell cultures have become a promising platform to produce bioactive ingredients for biomedical and cosmetic uses, but success so far has been limited. This study aimed to evaluate the effectiveness of this biotechnology process to obtain a bioactive Coffea canephora stem cell extract (SCECC) and subsequent liposome production of this extract (LSCECC) with antioxidant, anti-inflammatory and regenerative properties. The contents of total phenolics and flavonoids were determined in the SCECC extract by spectrophotometric analysis. Antioxidant activity was evaluated using the colorimetric methods of ABTS free radical scavenging and ferric ion reduction (FRAP). The anti-inflammatory activity was studied in RAW 264.7 macrophages stimulated by lipopolysaccharides, investigating the production of superoxide anion (O2●-), nitric oxide (NO), tumor necrosis factor alpha (TNF-a), interleukin-6 (IL- 6) and, the activity of nuclear factor kappa B (NF-kB). In addition, the ability of SCECC to stimulate fibroblast proliferation and migration was evaluated. The liposome was developed and characterized throught the dynamic light scattering (DLS) technique, atomic force microscopy (AFM) and transmission electron microscopy (TEM). Sixty animals were randomly divided into two groups of 20 animals each. Four full-thickness wounds were punctured in the posterior skin of each animal and treated topically with the LSCECC formulation (positive control) and vehicle control. After 2, 7, 14 and 21 days after wounding, five rats from each group were sacrificed and the rates of wound closure and re-epithelialization were evaluated. Wounds were collected for histological and biochemical analysis. High phenolic content and antioxidant activity were observed in SCECC extract. SCECC promotes the proliferation and migration of fibroblasts and suppresses the pro-inflammatory mediators (O2●-), NO, TNF-a and IL-6 in a dose-dependent manner. Furthermore, SCECC was able to inhibit the NF-kB transcription factor. LSCECC resulted in faster and greater reepithelialization of full-thickness excisional wounds in vivo, exhibiting a significant reduction in wound area of 36.41, 42.41 and 87.46% after 7, 10, 14 days after wounding, respectively, when compared to the control of the wound. vehicle. Histological and biochemical analyzes of skin biopsies showed that wounds treated with LSCECC exhibited an increase in granular tissue and an inflammatory response regulated by modulating the release of pro-inflammatory cytokines TNF-α, IL-6 and increased release of anti- inflammatory IL-10. Furthermore, wounds treated with LSCECC showed a marked and robust increase in the deposition and organization of collagen fibers at the wound site and improved scar tissue quality due to the increase in TGFβ and VEGF. Together, these data revealed that LSCECC accelerates tissue regeneration processes and may be beneficial for cosmetic product development.-
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