Determinação dos níveis de espécies reativas de oxigênio em leucócitos de pacientes com doença pulmonar obstrutiva crônica no Estado do Espírito Santo

Bulian, Carla Cristiana de Castro

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DC Field	Value	Language
dc.contributor	Campagnaro, Bianca Prandi	-
dc.contributor.author	Bulian, Carla Cristiana de Castro	-
dc.date.accessioned	2021-08-02T18:39:37Z	-
dc.date.available	2021-08-02T18:39:37Z	-
dc.date.issued	2014-11-20	-
dc.identifier.uri	https://repositorio.uvv.br//handle/123456789/812	-
dc.description.abstract	As espécies reativas de oxigênio são produzidas por uma fonte endógena (mitocôndrias), de forma contínua e fisiológica. Sua produção pode ser aumentada, a partir de estímulos exógenos, desequilibrando os mecanismos de defesa antioxidante do organismo, levando a um estresse oxidativo que estímula a liberação de mediadores inflamatórios lesando as células. Na doença pulmonar obstrutiva crônica, ocorre a formação de espécies reativas de oxigênio em excesso, levando a uma resposta inflamatória anormal devido à inalação de partículas ou gases tóxicos, principalmente o tabaco, que culmina na obstrução progressiva das vias aéreas, resultando na limitação ao fluxo aéreo, necessitando do uso de medicações inalatórias para tratamento. Nestes pacientes, tem sido feito estudos para medir as espécies reativas de oxigênio principalmente através da marcação de óxido nítrico e peróxido de hidrogênio exalados, e a identificação de enzimas antioxidantes no plasma, escarro, e lavado broncoalveolar. Por isso, este trabalho tem como objetivo, a avaliação da produção das espécies reativas de oxigênio pelos leucócitos dos pacientes portadores de doença pulmonar obstrutiva crônica, que fazem uso de medicações inalatórias, principalmente corticoide inalatório, através da citometria de fluxo. Foram selecionados e contatados por telefone 45 pacientes ex tabagistas, com idade variando de 45 a 80 anos, após realizarem espirometria foram divididos em 11 pacientes do grupo Controle, sem uso de medicações inalatórias. 8 pacientes do grupo DPOC II, em uso de Formoterol. 12 pacientes do grupo DPOC III, em uso de Formoterol e Brometo de Tiotrópio e 14 pacientes do grupo DPOC IV, em uso de Salmeterol + Fluticasona e Brometo de Tiotrópio. Após assinarem um termo de consentimento livre e esclarecido, foram coletadas 5 ml de sangue e levados para o Laboratório de Fisiologia Translacional da Universidade Federal do Espírito Santo. Para análise do estresse oxidativo, ). Para análise do estresse oxidativo 106 células foram diluídas em solução salina de fosfato tamponada e incubadas com 160μM de DHE e 20mM de DCFH-DA, por 30 minutos, 2μM DAF-2DA, por 180 minutos, 5μM HPF, por 15 minutos, todos a 37ºC no escuro e, depois lavadas e ressuspendidas em 0,5ml de PBSiFBS. Em cada experimento foi avaliado 10000 células. Os dados estão expressos como média±EPM e a análise estatística usada foi ANOVA de uma via, seguida pelo post hoc de Tuckey. A análise mostrou que nos pacientes dos grupos DPOCII, DPOCIII e DPOCIV, houve uma maior produção de ânions superóxido quando comparados ao grupo Controle (Controle: 3218±1,88; DPOC II: 5156±242; DPOC III: 6470±241; DPOC IV: 5223±151, a.u). A produção de óxido nítrico foi menor no grupo DPOC IV (1889±70, a.u), em comparação com todos os outros grupos. A produção de peróxido de hidrogênio foi menor no grupo DPOC IV (4825±233, a.u), em comparação com o grupo DPOC III (6524±691,a.u), porém foi maior que o grupo Controle (3034±98, a.u). A produção de radical hidroxila e peroxinitrito do grupo DPOC IV (1384±57, a.u) apresentaram menor produção em comparação com os do grupo DPOC III (2289±43, a.u), sendo que esta diminuição se mostrou quase igual a do grupo DPOC II (1315±43, a.u), porém maior que a do grupo Controle (771±20, a.u). Nossos resultados sugerem que portadores de doença pulmonar obstrutiva crônica apresentam um aumento das espécies reativas de oxigênio quando comparados com o grupo controle e que pacientes do grupo DPOC IV apresentam uma diminuição desta produção em comparação com o grupo DPOC III, que pode ser explicada pelo uso de corticoide inalatório e que o uso da citometria de fluxo para avaliação de espécies reativas de oxigênio em pacientes portadores de doença pulmonar obstrutiva crônica pode auxiliar o monitoramento da doença.	pt_BR
dc.language.iso	pt_BR	pt_BR
dc.subject	DPOC	pt_BR
dc.subject	Estresse oxidativo	pt_BR
dc.subject	Espécies reativas de oxigênio	pt_BR
dc.subject	Citometria de fluxo	pt_BR
dc.subject.vocabulary	CNPQ::CIENCIAS DA SAUDE::FARMACIA	pt_BR
dc.subject.vocabulary	CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICA	pt_BR
dc.title	Determinação dos níveis de espécies reativas de oxigênio em leucócitos de pacientes com doença pulmonar obstrutiva crônica no Estado do Espírito Santo	pt_BR
dc.type	Dissertation	pt_BR
dc.publisher.country	brasil	pt_BR
dc.description.resumo	Reactive oxygen species (ROS) are produced continuously and physiologicaly. However, this production can be increased from exogenous stimuli leading to oxidative stress which increases the release of inflammatory mediators injuring the cells. In chronic obstructive pulmonary disease (COPD), the inhale of toxic gases, mainly tobacco, increases the production of ROS leading to an exacerbated inflammatory response which culminates in progressive airflow limitation, requiring the use of inhaled drugs for airway clearance. Although many studies have shown increased ROS production in patients with COPD, little is known about the effects of COPD and its available treatments on systemic ROS production. Therefore, the aim of this study was to evaluate the production of ROS in leukocytes of patients with COPD, in treatment with inhaled medications, especially corticosteroids, by flow cytometry. So, 45 former smokers, aged 45-80 years, were contacted by telefone and, after performing spirometry, divided into 4 groups: patients without inhaled medications treatment (Control, N=11), patients using Formoterol (COPD II , N = 8), patients using Formoterol and Tiotropium Bromide (COPD III, N = 12) and patients using Salmeterol + Tiotropium Bromide and Fluticasone (COPD IV, N=14). After signing the free and informed consent form (Appendix) 5mL of peripheral blood were collected. Oxidative stress was determined by superoxide anion, nitric oxide, hydrogen peroxide, hydroxil radical and nitric peroxide production using the probes DHE, DAF,DCFH-DA and HPF, respectively. 106 cells were diluted with 1mL PBS and incubated with 160μM DHE and 20mM DCFHDA for 30 min, 2μM DAF-2DA, for 180 minutes and 5μM HPF, for 15 minutes, all at 37ºC in the dark. Then the cells were washed and resuspended in 0.5ml of PBS-iFBS. In each measurement, 10000 events were analyzed. Data were acquired and analyzed using the BD FACSDiva and FCS Express softwares. Data are means±SEM. Statistical analysis was performed with one-way ANOVA followed by Tuckey post hoc. Flow cytometric analysis showed that patients of DPOC II, DPOC III and DPOC IV groups, showed a greater production of superoxide anion compared to the control group (Control: 1.88±3218, COPD II: 5156±242; COPD III: 6470±241; COPD IV: 5223±151, a.u.). Among the experimental groups, the COPD III showed higher production of superoxide anion. However, among the COPD II and IV groups the superoxide anion production was different. The production of nitric oxide in the COPD IV group (1889±70 au) was lower compared to the other groups (Control: 3740±221; COPD II: 2948±150; COPD III: 2734±90, au). The production of hydrogen peroxide in groups COPD II (4607±271, au) and COPD IV (4825±233 au) was lower compared to the COPD III group (6524±691, au), but was higher than in Control group (3034±98 au). The production of hydroxyl radical and peroxynitrite anion in COPD IV group ( 1384 ± 57 au ) was lower compared to the COPD III group (2289±43 au), this reduction was similar to the COPD II group (1315±43 au), but higher than the Control group ( 771 ± 20 au ). Our results demonstrate that patients with COPD present an increase of ROS and patients of COPD IV group showed a decreased production compared to the COPD III group , probably due to the use of inhaled corticosteroids. Furthermore, the use of flow cytometry to evaluate the systemic ROS production in COPD patients cand be used to monitor the progression of the disease, as well as the therapeutic effect of the different drugs available for treatment.	pt_BR
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